細胞培養常見污染的識別

⒈細菌

        識別：細菌在顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，有球形，鏈形，桿形等。大家不必深究。只要發現培養液渾濁變黃，培養瓶頂部有一層細沙一樣的東西。就知道大事不好啦。

        處理：可在培養液中加相應的抗生素處理。可以用四環素，慶大霉素，或者鏈霉素，前兩者的工作濃度是50 μg/mL；鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。其實一旦發生污染，就已經大勢已去了。如果細胞不是特別特別珍貴的話，還是趁早扔了，重起爐灶吧。

        所以，重要的還是防范于未然。做好培養間，CO2孵箱，器皿和培養液的消毒滅菌工作。在操作的時候，嚴格執行無菌操作規范。

⒉霉菌

        識別：因為培養液是清亮的，所以霉菌污染非常難以早期發現，等發現時往往已經為時過晚了。培養液中慢慢地出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，如同風中柳絮。細胞仍可生長，但時間一長，細胞的狀態就變差。

        處理：細胞一旦被霉菌污染，很難挽救，兩性霉素B或制霉菌素都于事無補，建議果斷舍棄該污染細胞，將環境消毒。

        采用酒精底地擦洗一遍CO2培養箱。然后再用新潔爾滅擦洗一遍。把水盤里加上飽和量的硫酸銅。

⒊支原體

        識別：多為多邊形，培養液一般會變渾濁。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是和你一起慢慢變老。支原體污染后，可影響的細胞生長參數。故進行實驗前，確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。

        處理：沒有什么好處理的。直接扔了吧。

⒋黑蛟蟲

        識別：誰都不知道所謂的“黑膠蟲”是什么東西。據說是納米級的細菌。低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去。培養液也是不渾的，一般不會太影響。但是如果太多了，也會影響細胞生長和實驗結果。

        處理：因為根本不知道這是什么物種，所以也談不上什么處理方式。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。

⒌真菌

        識別：真菌污染和霉菌污染差不多。一般培養液清亮，所以很難早期發現。鏡下有時候象絲狀，有時候象珊瑚狀。慢慢地會長出很細的黑色絲狀物。這個時候，已經晚了，細胞很難救活了。

        處理：同霉菌污染一樣，沒有什么好處理的，直接扔了吧。然后消毒滅菌培養間，CO2孵箱，器皿和培養液。

        綜上所述，兩個原則：預防為主，果斷扔掉。如果細胞實在特別特別特別珍貴。那就只好死馬當活馬醫了。用廣譜抗生素5倍推薦濃度沖擊一下。當然細胞狀態差的話不熬得住。同時增加傳代時的細胞的密度，培養基中的血清濃度，勤換液。也可以不加抗生素進行單克隆有限稀釋至96孔板，再克隆化。