蠟樣芽胞桿菌的確證實(shí)驗(yàn)

⒈染色鏡檢

        挑取純培養(yǎng)的單個菌落，革蘭氏染色鏡檢。蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽性芽胞桿菌，大小為（1μm～1.3μm）×（3μm～5μm），芽胞呈橢圓形位于菌體中央或偏端，不膨大于菌體，菌體兩端較平整，多呈短鏈或長鏈狀排列。

⒉生化鑒定

        挑取純培養(yǎng)的單個菌落，進(jìn)行過氧化氫酶試驗(yàn)、動力試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、酪蛋白分解試驗(yàn)、溶菌酶耐性試驗(yàn)、V-P 試驗(yàn)、葡萄糖利用(厭氧)試驗(yàn)、根狀生長試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)。

⒊溶血試驗(yàn)

        挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落接種于TSSB 瓊脂平板上，電熱恒溫培養(yǎng)箱30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24h±2 h。蠟樣芽胞桿菌菌落為淺灰色，不透明，似白色毛玻璃狀，有草綠色溶血環(huán)或*溶血環(huán)。蘇云金芽胞桿菌和蕈狀芽胞桿菌呈現(xiàn)弱的溶血現(xiàn)象，而多數(shù)炭疽芽胞桿菌為不溶血，巨大芽胞桿菌為不溶血。

⒋根狀生長試驗(yàn)

        挑取單個可疑菌落按間隔0.5cm 左右距離劃平行直線于營養(yǎng)瓊脂平板上，

        30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。蕈狀芽胞桿菌形成根狀生長的特征。蠟樣芽胞桿菌菌株不具形成根狀生長的特征。

⒌蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)

        取經(jīng)電熱恒溫培養(yǎng)箱30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h 并于室溫放置3 d～4 d 的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)物少許于載玻片上，滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥，微火固定后，加甲醇作用30 s 后傾去，再通過火焰干燥，于載玻片上滴滿0.5％堿性復(fù)紅，放火焰上加熱（微見蒸氣，勿使染液沸騰)持續(xù)1 min～2 min，移去火焰，再更換染色液再次加溫染色30 s，傾去染液用潔凈自來水*清洗、晾干后鏡檢。觀察有無游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結(jié)晶體。如發(fā)現(xiàn)游離芽胞形成的不豐富，應(yīng)再將培養(yǎng)物置室溫2 d～3 d 后進(jìn)行檢查。除蘇云金芽胞桿菌外其它芽胞桿菌不產(chǎn)生蛋白結(jié)晶體。

⒍溶菌酶耐性試驗(yàn)

        用接種環(huán)取純菌懸液一環(huán)，接種于溶菌酶肉湯中，36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。蠟樣芽胞桿菌在本培養(yǎng)基(含0.001 ％溶菌酶)中能生長。如出現(xiàn)陰性反應(yīng)，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)24 h。巨大芽胞桿菌不生長。