創傷弧菌的制備及鑒定

       創傷弧菌屬革蘭氏陰性弧菌。在液體培養基中菌體大小為0.7*2-3μm,稍彎曲。在固體培養基中呈多樣性。有單鞭毛。培養特性：營養要求一般，MAX適生長溫度為30℃，兼性厭氧。在無NaCl及超過8%NaCl的培養基中不生長，可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生長，在含6%NaCl的蛋白胨水中生長良好。

         非冷凍樣品采集后應立即置7℃～10℃生化培養箱保存，盡可能及早檢驗；冷凍樣品應在45 ℃以下不超過15 min或在2℃～5℃不超過18 h解凍；如果樣品需要冷凍貯存，應在樣品中加等量緩沖甘油-氯化鈉溶液（液體樣品應加雙料），推薦貯存溫度為-70 ℃以下。
甲殼類，則應先在自來水中洗刷外殼并甩干表面水分，然后以無菌操作打開外殼，按上述要求取相應部分。
       以無菌操作取檢樣25 g（mL），加入3％氯化鈉堿性蛋白胨水225 mL，用旋轉刀片式均質器以8 000 r/min均質1 min，或拍擊式均質器拍擊2 min，制備成1:10的均勻稀釋液。如無均質器，則將樣品放入無菌乳缽中磨碎，然后放在500 mL的滅菌容器內，加225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。魚類和頭足類動物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部內容物，包括貝肉和體液；甲殼類取整個動物，或者動物的中心部分，包括腸和鰓。
        嗜鹽性試驗：挑取純培養的單個可疑菌落，分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水，生化培養箱內36 ℃±1 ℃培養24 h，觀察液體混濁情況。創傷弧菌在無氯化鈉、8％氯化鈉和10％氯化鈉的胰胨水中不生長，在6％氯化鈉的胰胨水中生長旺盛。
氧化酶試驗：挑選純培養的單個菌落進行氧化酶試驗，創傷弧菌為氧化酶陽性。
涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態。創傷弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀或弧狀。
        挑取純培養的單個可疑菌落，轉種3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層，36 ℃±1 ℃培養24 h觀察結果。創傷弧菌在3％氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應為底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，偶爾斜面變黃。
        V-P試驗：以接種針由3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面挑取少許培養物穿刺3％氯化鈉MR-VP培養基，36℃±1 ℃培養24 h，在加V-P試劑前應先觀察動力。沿穿刺線周圍呈擴散性生長為動力陽性。