wish細(xì)胞的傳代

wish細(xì)胞是上皮細(xì)胞， 人羊膜細(xì)胞 ，培養(yǎng)基我用的是最常見的1640（10％小牛血清，加雙抗）。

1、細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶時既要傳代。我用胰酶和edta的混合液消化。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。edta的終濃度是0.02%。

2、使用前37度預(yù)熱，每個25ml培養(yǎng)瓶加9滴的胰酶和edta混合液，消化液的量可根據(jù)自己培養(yǎng)瓶的大小而定，原則就是能夠蓋滿瓶底。加入胰酶和edta混合液以后，為使酶的活性最大，將培養(yǎng)瓶蓋擰緊后放回培養(yǎng)箱中，5分鐘左右即用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

如果在室溫情況下消化，時間相應(yīng)加長，可以用手給培養(yǎng)瓶加溫，是消化液發(fā)揮最大的作用。可以在顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞界限已十分清楚，從梭形變圓，即已分離為單個細(xì)胞，且有少量細(xì)胞漂起，則要終止消化了。

3、將消化液倒掉，用eagle液洗滌一次。然后倒掉。

4、加少量1640，用吸管輕輕吹打。

5、吸1/3至1/4的細(xì)胞懸液接種至新的培養(yǎng)瓶，然后加8ml的新的細(xì)胞培養(yǎng)基，置37度5％的二氧化碳培養(yǎng)箱完成傳代。